Étude d'application clinique pour la surveillance conjointe de l'adnc et du CTC dans le traitement du cancer du poumon

1. Avoir un laboratoire de biologie et un laboratoire de PCR 2. Avoir mené des projets sur les cellules tumorales circulantes (CTC) 3. Avoir des techniciens expérimentés, compétents en fonctionnement et ayant des qualifications d'entrée en fonction 1. établir des modèles prédictifs pour l'évaluation de l'efficacité du traitement avec deux méthodes de test CTC et cfdna chez les patients atteints de cancer du poumon à différents stades; 2 Établir des processus de détection normalisés et des normes d'interprétation des résultats. Évaluer la valeur de deux méthodes de détection pour surveiller le traitement du cancer du poumon, individuellement et conjointement, par le biais des tests CTC et cfdna: 1) clarifier la pertinence des tests CTC et cfdna pour l’efficacité du traitement du cancer du poumon, établir des modèles prédictifs; 2) Publication de documents SCI 1 - 2. Les résultats ultérieurs continuent à être déclarés comme base préalable. La détection de fragments d'ADN libre cellulaire (cfdna) est une technique de « biopsie liquide» qui a émergé et qui s'est développée plus rapidement ces dernières années. L’étude a révélé une augmentation anormale de l’adnc dans le plasma et le sérum sanguin [1] chez les patients cancéreux, suggérant que l’adnc est pertinent pour la tumeur et peut être un Biomarqueur pour évaluer le pronostic et surveiller l’efficacité [2]. À ce jour, l’adnc a été trouvé avec des modifications génétiques caractéristiques, y compris des mutations ponctuelles, l’instabilité des microsatellites, la superméthylation de l’adn, la délétion d’hétérozygotes, etc., dans de nombreuses tumeurs telles que le cancer colorectal, le cancer du pancréas, le cancer du poumon, etc. [3]. Plusieurs études ont montré un haut degré de cohérence entre les modifications génétiques de l’adnc et les modifications génétiques de la tumeur primaire et des cellules tumorales circulantes (CTC) [4, 5]. La CTC, ou circulation tumoral cell DNA (ctdna) cell free DNA fragment (cfdna), est une technique de « biopsie liquide» qui a émergé et qui a connu une croissance plus rapide ces dernières années. L’étude a révélé une augmentation anormale de l’adnc dans le plasma et le sérum sanguin [1] chez les patients cancéreux, suggérant que l’adnc est pertinent pour la tumeur et peut être un Biomarqueur pour évaluer le pronostic et surveiller l’efficacité [2]. À ce jour, l’adnc a été trouvé avec des modifications génétiques caractéristiques, y compris des mutations ponctuelles, l’instabilité des microsatellites, la superméthylation de l’adn, la délétion d’hétérozygotes, etc., dans de nombreuses tumeurs telles que le cancer colorectal, le cancer du pancréas, le cancer du poumon, etc. [3]. Plusieurs études ont montré un haut degré de cohérence entre les modifications génétiques de l’adnc et les modifications génétiques de la tumeur primaire et des cellules tumorales circulantes (CTC) [4, 5]. Le CTC ou ADN circulant des cellules tumorales (adnct) peut être utilisé comme nouveau Biomarqueur pour le diagnostic, le traitement et l’évaluation pronostique des tumeurs [6], mais il est présent en faibles quantités dans le sang périphérique des patients, n’est pas facilement extractible et identifiable, limite son application pratique en clinique en raison de sa complexité de manipulation, de son coût élevé et de ses longues périodes de surveillance [7]. Il existe des données préliminaires montrant une forte corrélation positive entre l'adnc et le contenu en adnct [8]. Ainsi, nous pouvons surveiller indirectement la réponse tumorale au traitement en détectant les niveaux d'adnc. De plus, les tissus ou cellules normaux subissent également une apoptose ou une nécrose après avoir été irradiés, libérant de grandes quantités de cfdna en peu de temps, dans des quantités pouvant suggérer un risque de dommages radiologiques [9]. La détection précise, rapide, pratique et efficace des variations du taux d'adnc dans le sang est essentielle au développement de l'application clinique de cette « technique de biopsie liquide», et notre unité de recherche collaborative a développé un ensemble de techniques d'amplification du signal d'acide nucléique (superbdnatm) qui reflètent indirectement le niveau global d'adnc En détectant le taux de séquences d'alu libres dans le sang. La séquence ALU est une séquence répétitive fortement exprimée, représentant environ 10% du génome [10] et présente de manière stable dans le sang total [11], dont l'expression est fortement corrélée au niveau de l'adnc total [12]. Cette plate - forme technologique a été utilisée pour quantifier la sensibilité de l'adnc jusqu'à 91,7% avec une spécificité de 88,6% [13, 14] et a reçu un brevet mondial américain (brevet US 2012 / 0003625 A1). Cette plate - forme technologique se caractérise par l'utilisation de molécules d'ADN branché (adnb) modifiées et d'un nouveau design de jeu de sondes pour améliorer l'amplification des signaux chimiques marqués sur les séquences d'ADN cibles sans amplifier les séquences cibles elles - mêmes (comme le montre la figure 1). Le principe de fonctionnement est le suivant: chaque jeu de sondes oligonucléotidiques contient deux types de sondes synthétiques, à savoir des sondes d'extension de capture (ces) et des sondes d'extension de marquage (les). Ces et les peuvent se lier à la séquence d'ADN cible. Tout d'abord magplex ™ Les sondes de capture couplées Microspheres (billes magnétiques) capturent la séquence d'ADN cible par ces - sondes de capture ainsi que par co - hybridation entre ces - ADN cible. Les les sont alors capables de se lier simultanément à l'ADN cible et à la sonde préamplifiée. 1 sonde préamplifiée contient 20 sites liés à la sonde d'amplification et 1 sonde d'amplification contient également 20 sites liés à la sonde marquée. Ainsi, le signal cible est finalement amplifié d'un facteur 400. Enfin, la sonde marquée à la biotine, associée à la streptavidine marquée à la phycoérythrine (sape), mesure l'intensité de fluorescence sur les billes magnétiques au moyen d'un instrument luminex tel que magpix. L'intensité de fluorescence est directement proportionnelle au nombre de molécules d'ADN présentes dans l'échantillon, ce qui permet d'extrapoler le niveau de cfdna dans l'échantillon. Cette méthode permet une détection quantitative très sensible de la concentration d'adnc dans les échantillons de plasma, avec des avantages tels que l'absence d'extraction, l'absence d'amplification, la facilité de manipulation, des cycles de détection courts et adaptés aux besoins de tests cliniques. Des chercheurs tels que Canales ont découvert, par comparaison, que superbdnatm présentait certains avantages par rapport à la PCR dans la détection de 244 gènes communs, tels que des biais plus faibles; L'élimination des effets d'erreur liés à la perte d'extraction d'ADN et à l'amplification; éviter la contamination croisée des échantillons; Facile à automatiser et à détecter par lots [15]. Cette technologie nous fournit le support technique nécessaire pour surveiller les modifications de l'adnc pendant le traitement des tumeurs.